Embriones y Espermatozoides de Conejo

Espermatozoides de Conejo

1. Introducción teórica

Los espermatozoides son las células sexuales o gametos masculinos, estos poseen una conjugación de cabeza y cola muy importantes a la hora de fecundación del ovulo. 
La cola es una prolongación alargada encargada de generar movilidad al espermatozoide para que logre de forma rápida la penetración de la capa externa del ovulo.
La cabeza a parte de  ser el organismo penetrador también es el núcleo de esta célula conteniendo la información genética necesario para la formación genética necesaria para la formación de un individuo una célula haploide, porque contiene la mitad de la carga genética, es decir 23 cromosomas.
Para poder realizar esta practica necesitábamos realizar una extracción de espermatozoides, en este caso de los conejos de la UMH, para ello se prepara una vagina artificial de plástico la cual hay que calentar a unos 40ºC que es aproximadamente la temperatura corporal del interior de la coneja. Se pude calentar tanto al microondas como al baño maría, pero si se hace al baño maría hay que tener mucho cuidado de que el agua no toque a los espermatozoides ya que esta los mata (por los cambios de presión osmótica).
Para poder ver los espermatozoides y diferenciarlos hay que diluir la mezcal con un diluyente que mantenga la presión osmótica y que tenga azucares para mantenerlos vivos y cítricos para que no se oxide, ya que el semen en si esta muy concentrado y en el microscopio solo se vería una masa. Depués para poder fijarlos y verlos hay que añadir al semen glutaraldehído.
Los espermatozoides pueden presentar distintas malformaciones:

Deformaciones de cabeza

Las principales formas amorfas que podemos encontrar en relación a la cabeza de los espermatozoides son las siguientes: cabeza grande, cabeza pequeña, cabeza acintada, cabeza piriforme, cabeza vacuolada (más del 20% del volumen ocupado por vacuolas), cabeza con área acromosomal pequeña (acrosoma menos del 40% de la cabeza) y cabezas dobles.
En ocasiones, los espermatozoides tienen un fallo en el desarrollo del acrosoma que estructuralmente ocasiona el defecto de una cabeza pequeña y redonda, alteración conocida como globozoospermia.
Otra alteración es la causada por los fallos de adherencia entre el acrosoma y el núcleo celular que provocan la separación de la cabeza y la cola. Como resultado, las cabezas son absorbidas y sólo las colas permanecen en el semen, ocasionando el defecto conocido como cabeza de alfiler.
Foto 1. Deformaciones de cabeza. teratozoospermia.com
Deformaciones en el cuello
Las alteraciones de la pieza intermedia de los espermatozoides que se consideran anormales son las siguientes: el cuello doblado (el cuello y la cola forman un ángulo mayor de 90º con respecto al eje longitudinal de la cabeza), la inserción asimétrica del cuello en la cabeza, el cuello grueso, el cuello irregular o el cuello muy fino.
Por otra parte, la ausencia de mitocondrias dentro de la pieza intermedia también es considerada una anomalía del cuello, ya que las mitocondrias son las encargadas de crear la energía necesaria para que los espermatozoides puedan desplazarse.
Foto 2. Deformaciones de cuello. teratozoospermia.com
Deformaciones en la cola
La cola del espermatoziode puede presentar varios defectos que afectan a su movimiento principalmente. Entre ellos, encontramos la cola corta, la cola doble o múltiple, la cola en horquilla, la cola rota, la cola doblada (ángulo mayor de 90º), la cola enrrollada y la cola de de espesor irregular.
La mayoría de estas anomalías no impederían a los espermatozoides poder fecundar al óvulo y dar lugar a un embrión viable. No obstante, causarían un problema de infertilidad conocido como astenoteratozoospermia porque estos espermatozoides no se mueven bien.
Foto 3. Deformaciones de cola. teratozoospermia.com

2. Material Necesario

  • Bata de laboratorio
  • Guantes
  • Microscópio
  • Espermatozoides de conejo
  • Portaobjetos
  • Eppendorf
  • Portaobjetos
  • Cubreobjetos
  • Vagina artificial
  • Pipeta Pasteur

3. Hipótesis

 En esta practica se espera poder observar los espermatozoides de la muestra de esperma de conejo y observar, si como pensamos, de todos los espermatozoides de una gota de esperma, mínimo la mitad salen con malformaciones.

4. Objetivos generales y específicos


  • Observar los espermatozoides del esperma
  • Observar las distintas malformaciones
  • Intentar contar los espermatozoides de la muestra

5. Método de experimentación


  1. Se coge la muestra de semen de conejo previamente conseguida con la vagina artificial a 40º para simular la Tº interior de la coneja.
  2. El semen recogido se diluye con un diluyente específico, para no matar a los espermatozoides por presión osmótica y se fijan con glutaraldehído.
  3. Se introduce el semen en un eppendorf y con la pipeta de Pasteur se vierte una gota sobre el portaobjetos, que seguidamente se tapa con el cubreobjetos.
  4. Se coloca la muestra en el microscopio a 40 y 100 aumentos.
  5. Se intentan contar todos los espermatozoides de la muestra i distinguir a los que tienen malformaciones. 

6. Obtención de resultados

Foto 4. Vagina Artificial 1. Elaboración propia
Foto 5. Vagina Artificial 3. Elaboración propia
Foto 7. Espermatozoides Aumento 100x. Elaboración propia

Foto 9. Ependorff y pipeta. Elaboración propia

Foto 4. Vagina Artificial 2. Elaboración propia
Foto 6. Material. Microscopio, cubre y porta. Elaboración propia
Foto 8. Espermatozoides Aumento 40. Elaboración propia
Foto 10. Apuntes de espermatozoides con malformaciones. Elaboración propia

 

7. Conclusiones

En esta practica hemos podido observar los espermatozoides del esperma de conejo, tanto vivos como muertos, que se veían perfectamente en los laboratorios de la UMH. Hemos encontrado espermatozoides con todos los tipos de malformaciones, tanto de cola como de cabeza y cuello.

8. Errores de la Práctica


  1. El esperma de conejo no era reciente, ya llevaba varios días guardado.
  2. El primer microscopio que utilizamos no funcionaba.

9. Confirmación o rechazo de la hipótesis

 Podemos confirmar que nuestra hipótesis es correcta, ya que hemos podido ver una gran cantidad de espermatozoides en una sola gota de esperma y entre ellos hemos podido observar las mal formaciones, pero no en la cantidad que esperábamos.

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